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極性改性反相色譜柱的日常維護

更新日期：2014-10-13 信息來源：本站瀏覽次數(shù)：2221

極性改性反相色譜柱的日常維護

正確使用緩沖鹽

緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑，因此緩沖鹽使用不當(dāng)會使其析出，堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙，使填料板結(jié)，柱壓上升；同時阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。緩沖鹽析出后，去除非常困難，因此，正確的使用緩沖鹽對延長色譜柱使用壽命非常重要。

正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽的方法可歸結(jié)為一句話：使用前要過渡，使用后要沖洗。具體方法如下：

1. 等度條件：使用緩沖鹽前需用過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗30min，

使用后去除緩沖鹽的另一個方法是用過渡流動相以0.2ml/min流速沖洗

色譜柱過夜。

2. 梯度條件：用含有緩沖鹽的流動相跑梯度之前，用與初始流動相組成相同的過渡流動相以1.0ml/min流速沖洗30min；分析完成后，再用該過渡流動相以1.0ml/min沖洗色譜柱45min。含緩沖鹽流動相的梯度設(shè)定應(yīng)盡量平緩，以避免梯度過程中緩沖鹽析出。

注意：過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同，區(qū)別只是過渡流動相中不含緩沖鹽。

3. 緩沖鹽析出的補救方法：

1）方案1：用甲醇/水＝20/80以1.0ml/min流速35℃條件下反向沖洗色譜柱120min；

2）方案2：用甲醇/水＝20/80以0.2ml/min流速反向沖洗色譜柱過夜。

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