分析色譜柱的使用：
使用預(yù)柱保護(hù)分析柱（硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）；
大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是2－8，盡量不超過該色譜柱的pH范圍；
避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化；
流動(dòng)相使用前需經(jīng)脫氣和過濾處理；
壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號(hào)。
分析色譜柱的污染后的清洗和再生要這樣做！
當(dāng)柱子被污染，它的色譜行為和沒被污染的柱子會(huì)有些不同。被污染的柱子能產(chǎn)生反壓問題。被污染的反相柱子必須清洗和再生才能恢復(fù)原來的操作條件。
再生被污染HPLC柱子的關(guān)鍵是知道污染物的性質(zhì)并且能找到適當(dāng)?shù)娜軇﹣砣コ?。如果污染是因?yàn)橹貜?fù)進(jìn)樣時(shí)強(qiáng)保留物質(zhì)的累積引起的，利用簡單的步驟來除去這些污染物往往能恢復(fù)其色譜行為。有時(shí)候，經(jīng)過多次操作以后的色譜柱用雙溶劑反相系統(tǒng)中較強(qiáng)的溶劑沖洗20個(gè)體積可以清除污染物。
一般來說，所有的清洗方法都有類似的形式。所用的溶劑都是隨溶劑強(qiáng)度增加，經(jīng)常最后一個(gè)溶劑是非常疏水的（如醋酸乙酯甚至是烴），可以用來溶解非極性物質(zhì)如脂質(zhì)和油類。我們保證一系列溶劑中每個(gè)溶劑都能與下一個(gè)溶劑互混。清洗過程要結(jié)束時(shí)，必須借助一個(gè)中等強(qiáng)度能互混的溶劑而回到原始溶劑系統(tǒng)。例如，異丙醇是一個(gè)非常好的作為中間步驟的溶劑，因?yàn)樗芘c正己烷或二氯甲烷互溶又能與水相溶劑互溶。但是異丙醇粘度非常大，必須確保較低的流速以免使泵壓過高。沖洗色譜柱時(shí)，沖洗液由色譜柱出液端直接接入廢液瓶，不能流經(jīng)檢測(cè)池，以免檢測(cè)池被污染。
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